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微生物常見生化培養(yǎng)基

硝酸鹽培養(yǎng)基
硝酸鉀   0.2g
蛋白     5g
蒸餾水   1000ml
PH       7.4
制法:溶解,校正PH,分裝試管,每管約5ml,121℃高壓滅菌15min。
硝酸鹽還原試劑
甲液:將對氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
乙液:將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
試驗方法
  接種后在36±1℃培養(yǎng)1~4d, 加入甲液和乙液各一滴,觀察結果。硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時于立刻或數(shù)分鐘內顯紅色。 
  注:本試驗陰性的原因有三:細菌不能還原硝酸鹽;亞硝酸鹽繼續(xù)分解,生成氨和氮;培養(yǎng)基不適于細菌的生長。如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否未被分解,可再加入鋅粉少許,可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現(xiàn)紅色。
氧化酶
1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液:少量新鮮配制,干燥冰箱內避光保存。
1%α—萘酚—乙醇溶液。
試驗方法
取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴,陽性者呈現(xiàn)粉紅色,并逐漸加深;再加α-萘酚溶液一滴,陽性者于半分鐘內呈現(xiàn)鮮藍色。陰性于兩分鐘內不變色。
   以毛細吸管吸取試劑,直接滴加于菌落上,其顯色反應與以上相同。
淀粉水解(生化試驗培養(yǎng)基,用于產乳酸的鏈球箘的鑒定)
蛋白胨          10g
NaCl            5g
牛肉膏          5g
可溶性淀粉      2g
蒸餾水          1000mL
瓊脂            15~20g
121℃滅菌20min
(PH7.6肉浸湯瓊脂 90mL
羊血清5mL
3%淀粉溶液 10mL
普通肉湯  100mL
葡萄糖    0.2g
PH值7.5~7.7
用法:將肉湯液瓊脂121℃高壓滅菌15分鐘,冷**50℃時,以無菌操作加入滅菌的淀粉溶液及無菌羊血清混合后,傾注滅菌平板備用。
明膠培養(yǎng)基(蛋白胨和牛肉膏提供氮源、維生素、礦物質;某些含明膠的細菌水解明膠,使其液化而降低明膠的膠凝作用)
蛋白胨     5g
牛肉膏      3g
明膠        120g
蒸餾水      1000mL
制法:將上述成分混合,置流動蒸汽滅菌器內,加熱溶解,校正PH**7.2~7.4,用絨布過濾。分裝試管,121℃滅菌15min,備用)
用法:1.用接種針穿刺接種
2.將試管置于35~37℃培養(yǎng)24h。
     3將接種物放于2~8℃約10~30min,待降溫后取出觀察,如仍呈溶解狀時即為明膠液化試驗陽性,如凝固不溶者為陰性。
尿素瓊脂(蛋白胨提供氮源,滿足細菌生長需要,氯化鈉維持穩(wěn)定的滲透壓,葡萄糖為可發(fā)酵糖,磷酸二氫鉀作為緩沖劑,酚紅是指示劑,瓊脂為凝固劑。用于細菌脲酶檢測)
蛋白胨        1g
氯化鈉        5g
葡萄糖        1g
磷酸二氫鉀    2g
0.4%酚紅溶液  3mL(酚紅  0.012g)
瓊脂          20g
蒸餾水        1000mL
20%尿素溶液  100mL(尿素  20g)
pH6.6~7.0
制法: 在蒸餾水或去離子水100mL中,加入上述所有成分(瓊脂除外),混合均勻,過濾滅菌。將瓊脂加入900mL蒸餾水或去離子水中,121℃滅菌15min,冷卻**50℃,加入滅菌好的基本培養(yǎng)基,混勻后,分裝于滅菌試管內,放成斜面?zhèn)溆?
試驗方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36±1℃培養(yǎng)24h,觀察結果.尿素酶陽性者由于產堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。
三糖鐵瓊脂(TSI)(適合于腸桿菌科的鑒定。)
原理:用于觀察細菌對糖的利用和硫化氫(變黑)的產生。該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1,只能利用葡萄糖的細菌,葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸,因接觸空氣而氧化,加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質,生成堿性產物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態(tài)下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。  而發(fā)酵乳糖的細菌(e.coli),則產生大量的酸,使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。  如培養(yǎng)基接種后產生黑色沉淀,是因為某些細菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氫,硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應,生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
蛋白胨             20g
牛肉膏             5g
乳糖               10g
蔗糖               10g
葡萄糖             1g
氯化鈉             5g
硫酸亞鐵銨〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸鈉         0.2g#p#分頁標題#e#
瓊脂               12g
酚紅               0.025g
蒸餾水             1000mL
pH7.4
制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH.加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂.加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻.分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層.121℃高壓滅菌15min.放置高層斜面?zhèn)溆?。
觸媒(又稱過氧化氫酶,具有過氧化氫酶的細菌,能催化過氧化氫成為水和原子態(tài)氧,繼而形成氧氣分子,出現(xiàn)氣泡。用于鏈球菌即革蘭氏陽性球菌初步分群)
用法:(1)玻片法:取18~24h培養(yǎng)物,置于清潔玻片上,家一滴3%過氧化氫溶液,如產生大量氣泡為陽性。
(2)試管法:取瓊脂斜面(不含血液的)18~24h培養(yǎng)物,接種于試管內,加入3%過氧化氫溶液1mL,如產生大量氣泡為陽性。
注意事項:①3%過氧化氫溶液要新鮮配制。
          ②不宜用血瓊脂平板上生長的菌落,因紅細胞含有觸媒,可致假陽性反應。
          ③取對數(shù)生長期的細菌。
Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗用)
蛋白胨                      2g
氯化鈉                      5g
磷酸氫二鉀                  0.3g
瓊脂                        4g
葡萄糖                      10g
0.2%溴麝香草酚藍溶液        12mL
蒸餾水                      1000mL
pH7.2
制法:將蛋白胨和鹽類加水溶解后,校正pH**7.2.加入葡萄糖,瓊脂煮沸,溶化瓊脂,然后加入指示劑.混勻后,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,直立凝固備用.
試驗方法:從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種,同時接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面,高度約1cm,于36±1℃培養(yǎng).
蛋白胨水(靛基質試驗用)
蛋白胨(或胰蛋白胨)       20g
氯化鈉                  5g
蒸餾水                  1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min.
靛基質試劑
柯凡克試劑:將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后緩慢加入濃鹽酸25mL.
歐-波試劑:將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內.然后緩慢加入濃鹽酸20mL.
試驗方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在36±1℃培養(yǎng)1~2d,必要時可培養(yǎng)4~5d.加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色.
注:蛋白胨中應含有豐富的色氨酸.每批蛋白胨買來后,應先用已知菌種鑒定后方可使用.
β—半乳糖苷酶試驗(ONPG)(用于遲緩發(fā)酵乳糖的細菌的快速鑒定)
原理:有β—半乳糖苷酶的細菌,可以分解鄰硝基酚β—半乳糖苷(ONPG),而釋放黃色的鄰硝基酚。
方法:取新鮮細菌一環(huán),加入到0.25mL的無菌生理鹽水中,加甲苯一滴充分振動,37℃,5min,再加入無色ONPG溶液0.25mL置于37℃水浴,懸液變黃則為陽性。
七葉苷水解試驗(主要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別)
原理:七葉苷可以被細菌分解為葡萄糖和七葉素,七葉素與培養(yǎng)基中的二價鐵反應,形成黑色化合物,使培養(yǎng)基變黑。
方法:將待檢測菌接種于七葉苷培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后觀察結果。
鼠李糖培養(yǎng)基
蛋白胨                    2.7g
氯化鈉                    5.0g
磷酸氫二鉀                0.3g
1%溴麝香草酚藍水溶液     3.0mL
瓊脂                      5.0g
蒸餾水                    1000mL
制法:(1)除指示劑外將上述成分混于蒸餾水,并加熱融化瓊脂。調PH7.0后,加入指示劑,做成基礎培養(yǎng)基。
     (2)按0.5~1%量稱取不同的糖(醇),每種分別加入15mL蒸餾水,調PH**7.0
     (3)根據(jù)制作培養(yǎng)基的量,加如上述基礎培養(yǎng)基,**后分裝小試管,20分鐘滅菌,置斜面。#p#分頁標題#e#
注意事項: 苦杏仁甙按0.2~0.3%量加入。阿拉伯糖需間歇三次滅菌,或過濾除菌。
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