培養(yǎng)細(xì)胞可能是一件棘手的事情。考慮到它們來(lái)自生物體，它們具有特定類型的需求，使它們能夠在有利但人工的條件下繁殖。在他們選擇的媒體中確保營(yíng)養(yǎng)豐富和溫度控制的環(huán)境是一個(gè)良好的開(kāi)端。但是，如何保持健康的細(xì)胞，以便您可以執(zhí)行成功的實(shí)驗(yàn)？
鑒于細(xì)胞培養(yǎng)是基礎(chǔ)研究和藥物發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)中使用的主要工具之一，已經(jīng)為各種細(xì)胞類型生成了過(guò)程和標(biāo)準(zhǔn)化方案。細(xì)胞活力程序和表征分析可以幫助維持適合您實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞。然而，細(xì)胞是生物，因此它們?nèi)绾紊L(zhǎng)以及讓它們快樂(lè)的變化自然會(huì)有一些變化。
以下是加州大學(xué)伯克利分校細(xì)胞培養(yǎng)基金會(huì)主任Alison Killilea和ATCC產(chǎn)品線業(yè)務(wù)經(jīng)理Kevin Grady的一些有用提示，旨在根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的共同挑戰(zhàn)保持細(xì)胞健康和快樂(lè)。
受污染的培養(yǎng)物可導(dǎo)致細(xì)胞減弱和死亡，或可改變影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的表達(dá)模式和轉(zhuǎn)染效率。支原體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)是一個(gè)挑戰(zhàn)，因?yàn)楦腥静灰撞煊X(jué)。可以進(jìn)行基于PCR的支原體檢測(cè)測(cè)定，或者必須使用核染色來(lái)觀察支原體所在的細(xì)胞膜上的點(diǎn)狀染色。所有培養(yǎng)物在使用前都應(yīng)進(jìn)行支原體檢測(cè)，特別是如果從另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室收到的話。
為了對(duì)抗污染，筆/鏈球是媒體的常見(jiàn)添加劑。但是，要注意不要使用抗生素，因?yàn)閴毫?huì)增加細(xì)胞的選擇和行為。筆/ strep還可以掩蓋污染問(wèn)題，使其擴(kuò)散。相反，確保無(wú)菌技術(shù)shou先用于防止任何污染。
無(wú)菌技術(shù)可能是任何細(xì)胞培養(yǎng)方案中**重要的一個(gè)方面。使用前后使用70％乙醇噴涂罩，在進(jìn)入罩前噴涂手套，打開(kāi)前噴灑介質(zhì)瓶。諸如此類的無(wú)菌技術(shù)可在不使用壓力筆/鏈條的情況下保持細(xì)胞快樂(lè)和無(wú)污染。
為了保持愉快的文化，請(qǐng)始終使用或**少?gòu)耐扑]的媒體開(kāi)始。某些細(xì)胞類型在適合它們的特定培養(yǎng)基中增殖更好。然而，無(wú)論使用何種介質(zhì)，某些實(shí)驗(yàn)條件都會(huì)使細(xì)胞受損。稀疏接種的細(xì)胞是不健康的，因?yàn)樯L(zhǎng)因子和其他激素的數(shù)量減少是由較少數(shù)量的細(xì)胞釋放的。為了克服這個(gè)問(wèn)題，如果需要稀疏鋪板的細(xì)胞，在傳代細(xì)胞時(shí)使用20％條件培養(yǎng)基與80％新培養(yǎng)基結(jié)合，以提供激素的初始嗡嗡聲，使細(xì)胞在新環(huán)境中感覺(jué)舒適。
胎牛血清（FBS）是細(xì)胞培養(yǎng)的另一種重要生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其含有低抗體水平和更多生長(zhǎng)因子，允許跨越不同細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用的靈活性。預(yù)測(cè)試和篩選FBS通過(guò)保持營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)在傳代中保持穩(wěn)定，有助于確保健康的細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
冷凍和解凍技術(shù)可以在右腳開(kāi)始新細(xì)胞，或?qū)е录?xì)胞死亡。冷凍細(xì)胞應(yīng)使用相關(guān)的慢速冷卻裝置以每分鐘一度的速度進(jìn)行。這會(huì)在細(xì)胞間產(chǎn)生均勻的凍結(jié)并限制冰晶的形成。可靠的冷凍機(jī)將使細(xì)胞保持恒定狀態(tài)，同時(shí)不會(huì)造成致命的凍融循環(huán)。
相反，解凍應(yīng)在37度水浴中快速進(jìn)行，然后重新懸浮在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)議以使細(xì)胞保持**佳狀態(tài)。確保精確地遵循它們，不要偏離定時(shí)程序，導(dǎo)致在水浴中花費(fèi)太多時(shí)間，或其他有害的延遲。
強(qiáng)烈建議常規(guī)的環(huán)境監(jiān)測(cè)習(xí)慣來(lái)測(cè)試實(shí)驗(yàn)室的清潔度。在細(xì)胞培養(yǎng)罩中留下開(kāi)放的瓊脂平板，氣流良好，然后孵育平板。如果罩子被正確清潔將是顯而易見(jiàn)的。可以使用培養(yǎng)箱進(jìn)行相同的測(cè)試，將開(kāi)放的培養(yǎng)基瓶?jī)?chǔ)存一段時(shí)間。確保使用具有良好層流的優(yōu)質(zhì)生物安全柜是任何細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室維持健康細(xì)胞培養(yǎng)而不受外界環(huán)境影響的重要特征。
對(duì)CO2和溫度變化進(jìn)行培養(yǎng)箱檢查可以是保持細(xì)胞快樂(lè)的重要方面。如果他們的外部環(huán)境不穩(wěn)定，那么他們也不會(huì)。因此，選擇能夠保持恒定CO2水平和溫度范圍的優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)箱可以節(jié)省時(shí)間和潛在的細(xì)胞系。
維持細(xì)胞培養(yǎng)需要時(shí)間，耐心和適應(yīng)性技術(shù)，以便為細(xì)胞的良好生長(zhǎng)創(chuàng)造合適的環(huán)境。一旦掌握，健康的細(xì)胞培養(yǎng)可能是成功實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。
